光片成像-Lightsheet荧光显微成像
Lightsheet荧光显微技术
Lightsheet的目标与共聚焦一样,也是进行三维成像。与传统上的激光扫描共聚焦/转盘共聚焦、双光子共聚焦相比,Lightsheet的优势在于很小的光漂白(因为激光扫描共聚焦/转盘共聚焦都会扫到焦平面外的荧光探针)以及能够观察大到1cm的样品(双光子共聚焦仅有1mm左右)。而且由于可以直接采用高-分辨率的相机直接对一个焦平面同时成像,所以针对较大样品的时候速度也比共聚焦的扫描要更快。Lightsheet技术可以实现超大样品块、快速扫描、深度成像、高-分辨率、3D动态图像输出,因而受到生命科学研究者,尤其是神经发育显微成像领域的研究者的欢迎。
Lightsheet技术用途
Lightsheet传统光学显微镜和MRI,CT等成像之间的空隙;在遗传、发育等研究中有着较好的应用及前景。因为遗传发育学研究者在选择模式生物(如斑马鱼、果蝇、线虫等)的时候,透明以利于观察以及生命周期短是两个着重考量的因素;透明对于Lightsheet的作用不言而喻,生命周期短的动植物一般也不会长得太大,所以这些模式生物都比较适合于Lightsheet的功能。
Lightsheet技术操作
Lightsheet(光片照明)显微镜使用一层光束从样品侧面激发荧光样品,通过sCMOS相机来检测成像,而入射照明光路和sCMOS接收荧光光路互相垂直。通过移动样品使入射光面激发不同的平面,且激发光束从左右两个方向入射到样品上,光束的角度可以改变,这样就可以很容易的得到整个组织的3D图像,同时保证细胞水平的分辨率。由于样品受激发的平面就是成像平面,所以可以将光漂白和光学损伤降低到较低。
Lightsheet技术对成像的要求
Lightsheet对于相机的主要要求是高速、高像素和高灵敏度。高速对应了整套lightsheet所需要的时间分辨率;高像素则对应的是样品的尺寸,如果像素不够会导致实际成像分辨率的下降;高灵敏度一个是为了减小曝光时间,另一个则是因为lightsheet所观察的样品偏厚,从样品深处发出的荧光不可避免地会损失得比较厉害,高灵敏度有利于弥补这个情况。
Lightsheet技术成像产品
基于lightsheet技术对于成像设备分辨率、高速度、高灵敏度的基本要求,sCMOS和速度快一些的EMCCD相机能很好的胜任lightsheet成像的任务。
滨松公司的sCMOS相机Flash 4.0V3非常适合用于lightsheet成像,除此之外,滨松Flash 4.0另提供专门的Lightsheet读出模式,更是市场上此项应用中相机的。
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